АКАДЕМІЯ МЕДИЧНИХ НАУК УКРАЇНИ 
Інститут фтизіатрії і пульмонології ім. Ф.Г.Яновського АМН України
УДК: 616.24-002.5-07:576.852.211
ЗАТВЕРДЖЕНО:
Вченою радою Інституту фтизіатрії і пульмонології ім. Ф.Г.Яновського АМН України протокол № З від 28.02. 2000 р.
СПОСІБ ВИЯВЛЕННЯ ПЕРСИСТЕНЦЙ МІКОБАКТЕРІЙ ТУБЕРКУЛЬОЗУ
(Інформаційний лист)

Київ 2000
Інститут фтизіатрії і пульмонології їм. Ф.Г.Яновського АМН України
Автори: К.Ф. Чернушенко, М.Т. Клименко, О.А. Журило, ПІ. Барбова, Л.М. Циганкова, С.Г. Ясир, Ж.Є. В'ялих
тел. 277-42-22,277-55-11. Рецензент: проф. В.І. Коржов
Існуючи методи виявлення персистенції збудника туберкульозу - інтенсивність імунних реакцій на туберкулін (in vivo і in vitro) та рівень специфічного антигену не завжди мають діагностичне значення, оскільки інфекування атиповими мікобактеріями та іншими мікроорганізмами, що мають перехресні антигени з мікобактеріями туберкульозу (МБТ), створюють труднощі у використанні імунологічних тестів з практичною метою.
Багатьма дослідниками доведено, що МБТ можуть персистувати в організмі людини у вигляді біологічно змінених форм - L-форм. Останні виявляються, як правило, із харкотиння хворих на туберкульоз через 1-5 міс. після припинення виділення типових бактеріальних форм МБТ, тобто вони знаходяться в організмі в стані персистенції.
Особливе значення придається, нестабільним варіантам L-форм, які після кількох пасажів in vitro можуть реверсувати в типові бактеріальні форми МБТ. Ці ревертантні культури мають всі властивості, притаманні збуднику туберкульозу, включаючи і вірулентність.
Однак для виявлення L-форм МБТ звичайні методи бактеріальних досліджень не підходять. Потрібні спеціальні поживні середовища, що містять стабілізатори і осмотичні протектори.
Для виявлення персистенції туберкульозу у вигляді L-форм МБТ потрібно застосувати посів свіжозібраного харкотиння пацієнта на спеціальне напіврідке живильне середовище. Дорожкової з паралельним посівом на звичайне щільне живильне середовище Левенштейна-Йенсена (для контролю на виявлення типових бактеріальних форм МБТ). Після обробки харкотиння 3% розчином сірчаної кислоти і трикратним відмиванням фізіологічним розчином хлористого натрію осад засівають на ряд пробірок. Пробірки з посівами закривають гумовими пробками замість ватномарльових, щоб уникнути висихання середовища, і інкубують в термостаті при 37° С протягом 2-х міс. Облік результатів посіву проводиться щотижня макроскопічне та за допомогою фазовоконтрастної мікроскопії.
В позитивних випадках в товщі напіврідкого середовища видно ніжний хмаркоподібний ріст у. вигляді дрібних завислих колоній. За допомогою пастеровської піпетки із ділянок видимого росту береться невелика крапля матеріалу, наноситься на предметне скло, покривається покривним скельцем та мікроскопується в фазовоконтрастному мікроскопі.
Для виявлення можливої реверсії L-форм в типові бактеріальні форми МБТ колонії L-форм пересівають на щільне живильне середовище Левенштейна-Йенсена, розлите в чашки Петрі. Через кожну добу протягом 7 діб з поверхні середовища, дотримуючись правил асептики, беруть мазок-відбиток стерильним предметним склом. Мазок фіксують над полум'ям горілки, фарбують за Ціль-Нільсеном і мікроскопують під імерсійним об'єктивом світового мікроскопу. Щоб отримати ревертантну культуру, з поверхні живильного середовища роблять зіскріб і засівають на косяки з щільним яєчним середовищем.
L-форми МБТ, що реверсували в типову бактеріальну форму in vitro, можуть реверсувати і в організмі хворого при сприятливих для цього умовах, якими може бути зниження імунного статусу організму або передчасне припинення антибактеріальної терапії. Тому виявлення збудника у вигляді L-форм МБТ слід розцінювати як бактріовиділення МБТ при вирішенні питання про продовження специфічної терапії та про групу диспансерного обліку пацієнта, враховуючи етіопатогенетичну та епідеміологічну небезпеку наявності збудника туберкульозу.